بررسی‌های آزمایشگاهی و مطالعات حیوانی

1- تعیین دوز كشنده HESA.A ( گوارشی LD50/24h)

بنابراین آزمایش با افزایش دوز مصرف خوراكی به میزان 6/274 میلیگرم برای هر موش (معادل 13370میلیگرم بر كیلوگرم) مرگ و میری مشاهده نشد. لذا با در نظر گرفتن LD50 گوارشی بین 15000mg/kg - 5000mg/kg عملاً فرآورده HESA.A جزء مواد غیر سمی طبقه بندی می‌گردد.

2- بررسی سمیت حاد و تحت حاد HESA.A

در این آزمون سمیت خوراكی حاد و تحت حاد فرآورده HESA.A با دوز 7/13gr/kg (حاد) و 5000mg/kg و 2500 و 1250 (تحت حاد) برای 30 روز متوالی مورد بررسی قرار گرفت كه هیچگونه مرگ ومیر در پی نداشت. متغیرهای مورد توجه در این مطالعه عبارت بودند از: وزن، علایم عمومی، عوامل بیوشیمیایی خون و تغییرات خونی و بافتی.

• نتیجه یك: یک فراورده بدون عوارض جانبی یا (NOAEL(no-observed-adverse-effect level در حالت تحت حاد به شمار آورد. بنابراین HESA.A یك فرآورده ایمن (Safe) می باشد.
• نتیجه دو: وزن گیری حیوانات مورد آزمایش هیچ تفاوتی با گروه كنترل نداشت در حالیكه می‌دانیم بسیاری از داروهای ضد سرطان موجب تخریب سلول‌های اپیتلیال لوله گوارش، تهوع، استفراغ، بی اشتهایی و سوء جذب می‌گردند كه نتیجه نهایی همه اینها كاهش وزن است.
• نتیجه سه: افزایش آنزیمهای كبدی(AST,ALT) در نتیجه آسیب به سلولهای كبدی و ایجاد سمیت كلیوی كه در اكثر داروهای ضد سرطان ایجاد می‌شود در هیچ دوزی از HESA.A دیده نشد كه نشان می‌دهد این فرآورده موجب آسیب كبدی و كلیوی نمی‌شود.
• نتیجه چهار: سركوب مغز استخوان نیز كه عارضه شایع داروهای رایج ضدسرطانی است و موجب تغییرات در سلولهای خونی و غلظت هموگلوبین می‌گردد در استفاده از HESA.A مشاهده نگردیده است.

3- بررسی سمیت مزمن HESA.A

تست كامل C.B.C (گلبول‌های قرمز، سفید، پلاكت و ریزفاكتورهای مربوطه)، SGOT، SGPT، آلكالن فسفاتاز و لاكتات دهیدروژناز در گروه كنترل با سه گروه مورد كه به مدت سی روز ، روزانه ، 5000mg/kg و 2500 و 1250 از فرآورده HESA.A دریافت نمودند هیچ تفاوت معنی‌داری نداشته و در نتیجه فرآورده مورد نظر بر كلیه متغیرهای مورد بررسی بی تأثیر می‌باشد.

4- بررسی اثرات بافت‌شناسی HESA.A

نتایج حاصل از بررسی بافتهای كبد، پوست، مغز، طحال، كلیه، روده، معده، قلب، ریه و عضله نشانگر آن است كه HESA.A با دوزهای 1250mg/kg (بیست و پنج برابر دوز درمان) و 2500mg/kg (پنجاه برابر دوز درمان) به مدت سی روز هیچگونه علامت پاتولوژیك اعم از میكروسكوپی و ماكروسكوپی ایجاد نكرده است. در دوز 5000mg/kg (صد برابر دوز درمان) تغییرات مختصر به صورت انفیلتراسیون سلولهای تك هسته‌ای لنفوسیتی در نسج كبد مشاهده شد ولی در سایر بافتهای مذكور هیچگونه تغییری مشاهده نگردید.

5 و 6- اثرات آنتی اكسیدانی و حفاظت كبدی HESA.A

این مطالعه خرگوش نشان داد شاخصهای قند، اوره، كراتی نین، كلسترول و تری گلیسیرید در دو گروه مورد با گروه كنترل هیچ تفاوت معنی داری پیدا نكرده است. این تحقیق هم چنین بیانگر افزایش ظرفیت آنتی‌اكسیدانی سرم در دو گروه مورد به طور معنی دار بود.

• نتیجه یك: این فرآورده می‌تواند از این طریق با عوامل ایجاد كننده رادیكالهای آزاد و مواد توكسیك مقابله كند.
• نتیجه دو: این فرآورده توانست به‌عنوان ماده محافظت کننده در دوزهای به كاربرده شده در حیوانات آزمایشگاهی به طور چشمگیری از ایجاد آنزیمهای كبدی SGOT، LDH توسط ماده سمی تیواستامید جلوگیری کند.

7- سمیت سلولی HESA.A در سلولهای سرطانی و نرمال

دراین مطالعه مهم اثرات HESA.A بر سه نوع سلول سرطانیHepII، Hela ،MDA-MB -468 و دو نوع سلول نرمال L929 و McCoy بررسی و مقایسه شد. چنانكه در متن كامل مقالات و گزارشها آمده این آزمایشات با غلظتهای متفاوتی از HESA.A، چندین بار تكرار شده‌اند.

• نتایج نشان داد كه فرآورده HESA.A با غلظت مورد نظر توانسته است بر روی سلولهای سرطانی اثر سمیت سلولی داشته باشد (8 بار تكرار).
• از طرف دیگر این دارو بر سلولهای نرمال اثر سمیت سلولی معنی داری نداشته (10- 3 بار تكرار) و حتی در دوزهای خاصی موجب تحریك رشد گردیده است. به عبارت دیگر می توان ادعا كرد این دارو به صورت اختصاصی عمل كرده و تنها سلولهای سرطانی را هدف قرار می‌دهد.

8- بررسی سمیت جنینی HESA.A

در این تحقیق تأثیرات تراتوژنیسیته HESA.A طبق پروتكل استاندارد GLP در موش آزمایشگاهی مورد بررسی قرار گرفت. دوزهای مختلف HESA.A از 5000mg/kg - 50mg/kg به صورت خوراكی به موشهای باردار در روزهای ششم تا چهاردهم بارداری تجویز شد و سپس موشها در روز هجدهم سزارین شده و مورد بررسی قرار گرفتند. نتایج حاكی از آن بود كه در دوزهای بالاتر از 800mg/kg (شانزده برابر دوز درمان) اختلال وزن گیری در موش مادر و رحم مشاهده می‌شود. همچنین در دوزهای بالاتر از 1200mg/kg (بیست و چهار برابر دوز درمان) اختلالات اسكلتی در جنین ایجاد می‌شود. در مجموع این تحقیق نشان داد كه دوزهای 300mg/kg و 150، 100، 50 هیچگونه تاثیر سوء جنینی در موش‌ها نداشته است.

9- آثار جهش سلولی HESA.A

این مطالعه با به كارگیری یكی از مهمترین آزمونهای تشخیص ژنی یعنی تست ایمز (Ames) توان بالقوه جهش زایی فرآورده HESA.A را مورد بررسی قرار داد. نهایتاً فرآورده HESA.A به عنوان یك فرآورده ضد سرطان بدون اثرات جهش سلولی شناخته شد.

10 – آنالیز HESA.A

به عنوان یك نظریه می‌توان اثرات ضد توموری و آنتی‌اكسیدانی این فرآورده را مربوط به عناصر كمیاب و فلزاتی مثل (Ti, V, Co, Cu, Sr, Ca, Mg, Mn, Ga, Cr, Zi,…) دانست كه در این تركیب وجود داشته و اثرات درمانی یا كمكی و یا پیشگیری كننده آنها در بسیاری از مطالعات مورد بررسی و اثبات قرار گرفته است.