بررسی های آزمایشگاهی و مطالعات حیوانی

1. تعیین دوز كشنده HESA.A ( گوارشی LD50/24h )

این مطالعه در آزمایشگاه فارماكولوژی بیمارستان قائم (عج) دانشگاه علوم پزشكی مشهد و با همكاری اساتید گروه فارماكولوژی و سم شناسی و صرفا جهت بررسی سمیت حاد (LD50) طراحی گردید. بنابراین آزمایش با افزایش دوز مصرف خوراكی به میزان 6/274 میلیگرم برای هر موش ( معادل 13370میلیگرم بر كیلوگرم) مرگ ومیری مشاهده نشد.لذا با در نظر گرفتن LD50 گوارشی بین 15000mg/kg - 5000mg/kg عملا فرآورده HESA.A جزء مواد غیر سمی طبقه بندی می گردد.

گزارش دانشگاه علوم پزشكی مشهد با عنوان:
« تعیین دوز كشنده LD50/24h گوارشی پودر كمپلكس HESA.A بر روی موشهای آزمایشگاهی»

2. بررسی سمیت حاد و تحت حاد HESA.A

این مطالعه با همكاری و هماهنگی دانشگاه علوم پزشكی اصفهان (دانشكده داروسازی، بخش بیوشیمی و بخش پاتولوژی دانشكده پزشكی) و دانشگاه علوم پزشكی مشهد (بخش سم شناسی دانشكده پزشكی) و به همت هفت تن از محققین واعضای هیأت علمی به انجام رسیده است.

 دراین آزمون سمیت خوراكی حاد و تحت حاد فرآورده HESA.A با دوز 7/13gr/kg (حاد) و 5000mg/kg و 2500 و 1250 (تحت حاد) برای 30 روز متوالی مورد بررسی قرار گرفت كه هیچگونه مرگ ومیر درپی نداشت.

متغیرهای مورد توجه در این مطالعه عبارت بودند از:
وزن، علایم عمومی، عوامل بیوشیمیایی خون و تغییرات هماتولوژیك و بافت‌شناسی.

• نتیجه یك: HESA.A را می توان به عنوان یك (NOAEL(no- observed- adverse- effect level در حالت تحت حاد به شمار آورد. بنابراین HESA.A یك فرآورده ایمن (Safe) می باشد.
• نتیجه دو: وزن گیری حیوانات مورد آزمایش هیچ تفاوتی با گروه كنترل نداشت در حالیكه می دانیم بسیاری از داروهای ضد سرطان موجب تخریب سلولهای اپیتلیال لوله گوارش، تهوع، استفراغ، بی اشتهایی و سوء جذب می گردند كه نتیجه نهایی همه اینها كاهش وزن است.
• نتیجه سه: افزایش آنزیمهای كبدی(AST,ALT) در نتیجه آسیب به سلولهای كبدی وایجاد سمیت كلیوی كه دراكثر داروهای ضد سرطان ایجاد می شود در هیچ دوزی از HESA.A دیده نشد كه نشان می دهد این فرآورده موجب آسیب كبدی و كلیوی نمی شود.
• نتیجه چهار: سركوب مغز استخوان نیز كه عارضه شایع داروهای رایج ضدسرطانی است و موجب تغییرات در سلولهای خونی و غلظت هموگلوبین می گردد در استفاده از HESA.A مشاهده نگردیده است.

3- بررسی سمیت مزمن HESA.A

در این مطالعه كه به همت اعضای هیأت علمی گروه بیوشیمی(دانشكده داروسازی) و گروه آمار (دانشكده بهداشت) به انجام رسیده است مشخص گردید:

تست كامل C.B.C(گلبول قرمز ، سفید ، پلاكت و ریزفاكتورهای مربوطه) ، SGOT ، SGPT ، آلكالن فسفاتاز و لاكتات دهیدروژناز درگروه كنترل با سه گروه مورد كه به مدت سی روز ، روزانه 5000mg/kg و 2500 و 1250 از فرآورده HESA.A دریافت نمودند هیچ تفاوت معنی داری نداشته و در نتیجه فرآورده مورد نظر بر كلیه متغیرهای مورد بررسی بی تأثیر می باشد.

• گزارش دانشكده داروسازی دانشگاه علوم پزشكی اصفهان با عنوان:
  « بررسی اثر مزمن داروی HESA.A روی فاكتورهای بیوشیمیایی درموش سوری و رات»


• گزارش دانشكده داروسازی دانشگاه علوم پزشكی اصفهان با عنوان:
  « بررسی سمیت مزمن HESA.Aدر موش سوری و رات »

4- بررسی اثرات هیستوپاتولوژیك HESA.A

هدف از این تحقیق تعیین اثر فرآورده HESA.A به صورت مزمن روی بافتهای مختلف موش سوری و رات بوده است كه به همت اعضای هیات علمی گروه پاتولوژی (دانشكده پزشكی) و گروه آمار (دانشكده بهداشت) به نتیجه رسید.

نتایج حاصل از بررسی بافتهای كبد، پوست، مغز، طحال، كلیه، روده، معده، قلب، ریه و عضله نشانگر آن است كه HESA.A با دوزهای 1250mg/kg ( بیست وپنج برابر دوز درمان )و 2500mg/kg ( پنجاه برابر دوز درمان) به مدت سی روز هیچگونه علامت پاتولوژیك اعم از میكروسكوپی و ماكروسكوپی ایجاد نكرده است.

در دوز 5000mg/kg (صد برابر دوز درمان) تغییرات مختصر به صورت انفیلتراسیون سلولهای تك هسته ای لنفوسیتی در نسج كبد مشاهده شد ولی در سایر بافتهای مذكور هیچگونه تغییری مشاهده نگردید.

بر اساس این آزمایش نیز در مقایسه با گروه كنترل فرآورده مذكور از نظر هیستوپاتولوژی تاثیر منفی significant نداشته وعملا در دسته داروهای غیر سمی قرار می گیرد.

• گزارش مركز پزشكی الزهراء دانشگاه علوم پزشكی اصفهان با عنوان:
  «نتایج بررسی هیستوپاتولوژیك نمونه های كالبد شكافی از موش رات و سوری پس از تجویز مزمن و با دوزهای متفاوت داروی HESA.A »

5- اثرات آنتی اكسیدانی HESA.A

این بررسی با تلاش اعضای هیأت علمی(بخش سم شناسی، بیوشیمی و گروه آمار) به نتیجه رسید و نشان داد كه این فرآورده در بررسی invitro بر روی گلبولهای قرمز در غلظتهای بالا اثرات تخریبی داشته اما با كم كردن غلظت دارو خاصیت آنتی اكسیدانی آن ظاهر گشته و در یكسری غلظتها دارای خاصیت آنتی اكسیدانت می باشد و مجدداً در غلظتهای خیلی پایین اثر خاصی را بر گلبولهای قرمز نشان نداده است.

• گزارش دانشكده داروسازی علوم پزشكی اصفهان باعنوان:
  «بررسی اثر آنتی اكسیدانت HESA.A»

6- اثرات آنتی اكسیدانی و حفاظت كبدی HESA.A

این مطالعه به همت اعضای هیأت علمی مركز تحقیقات قلب و عروق بر روی پانزده خرگوش انجام شدكه نشان داد شاخصهای قند، اوره، كراتی نین، كلسترول و تری گلیسیرید در دو گروه مورد با گروه كنترل هیچ تفاوت معنی داری پیدا نكرده است.

این تحقیق هم چنین بیانگر افزایش ظرفیت آنتی اكسیدانی سرم در دو گروه مورد به طور معنی دار بود.

• نتیجه یك: این فرآورده می تواند از این طریق با عوامل ایجاد كننده رادیكالهای آزاد و مواد توكسیك مقابله كند.
• نتیجه دو: این فرآورده توانست در دوزهای به كاربرده شده در حیوانات آزمایشگاهی به طور چشمگیری از ایجاد آنزیمهای كبدی SGOT،LDH توسط ماده سمی تیواستامید جلوگیری نماید و نقش حفاظتی خود را برروی سلولهای كبدی ثابت كند.

2. گزارش مركز تحقیقات قلب و عروق دانشگاه علوم پزشكی اصفهان با عنوان:«بررسی اثرات آنتی اكسیدانی و حفاظت كبدی پودر كمپلكس HESA.A به صورت invivo»

7- سیتوتوكسیسیتی HESA.A در سلولهای سرطانی و نرمال

دراین مطالعه مهم اثرات HESA.A بر سه نوع سلول سرطانی HepII، Hela ،MDA-MB -468 و دو نوع سلول نرمال L929 و McCoy بررسی و مقایسه شد.

چنانكه در متن كامل مقالات و گزارشها آمده این آزمایشات جهت اطمینان خاطر و با غلظتهای متفاوتی از HESA.A، چندین بار تكرار شده اند.

• نتایج نشان داد كه فرآورده HESA.A با غلظت مورد نظر توانسته است بر روی سلولهای سرطانی اثر سیتوتوكسیك داشته باشد ( 8 بار تكرار ).
• از طرف دیگر این دارو بر سلولهای نرمال اثر سیتوتوكسیك معنی داری نداشته (10 - 3 بار تكرار ) و حتی در دوزهای خاصی موجب تحریك رشد گردیده است.
  به عبارت دیگر می توان ادعا كرد این دارو به صورت اختصاصی عمل كرده و تنها سلولهای سرطانی را هدف قرار می دهد.
  
  1. "CYTOTOXICITY AND ANTITUMOR PROPERTIES OF A MARINE COMPOUND ON CANCER CELLS (HESA.A)"Published in Medical Journal of Islamic Academy of siences 2000, 13:2,55-61
  2. CYTOTOXIXITY AND ANTITUMOR PROPERTIES OF A MARINE COMPOUND, HESA.A, ON CANER CELLS"ll, No3,p: 11-3 :DARU, Journal of Tehran university of Medical sciences,2003, vol
  

  دریافت مقاله

  3. "HESA.A: A Natural Marine Compound with Selective Effects on Cancer Cells" Accepted & Presented in AAPS PHARMACEUTICA Annual Meeting ,Canada, 2002

  دریافت مقاله
• گزارش دانشكده داروسازی دانشگاه علوم پزشكی اصفهان تحت عنوان:
  «بررسی سیتوتوكسیسیتی داروی طبیعی HESA.A بر روی سلولهای سرطانی نرمال به روشMTT »
• گزارش پژوهشكده بوعلی دانشگاه علوم پزشكی مشهد با عنوان:
  « بررسی كیفی اثر داروی HESA.A بر روی رده های سلولی نرمال و سرطانی »
• گزارش پژوهشكده بوعلی دانشگاه علوم پزشكی مشهد با عنوان:
  «بررسی كمی اثر داروی HESA.A بر روی رده های سلولی نرمال و سرطانی با استفاده از روشMTT »

8- بررسی سمیت جنینی HESA.A

در این تحقیق كه اعضای هیات علمی بخش فارماكولوژی و سم شناسی دانشگاه علوم پزشكی مشهد و اصفهان به آن همت گماردند، تاثیرات تراتوژنیسیته HESA.Aرا طبق پروتكل استانداردGLP در موش آزمایشگاهی مورد بررسی قرار دادند.

دوزهای مختلف HESA.A از 5000mg/kg - 50mg/kg به صورت خوراكی به موشهای باردار در روزهای ششم تا چهاردهم بارداری تجویز شد و سپس موشها در روز هجدهم سزارین شده و مورد بررسی قرار گرفتند.

نتایج حاكی از آن بود كه :

• در دوزهای بالاتر از 800mg/kg (شانزده برابر دوز درمان) اختلال وزن گیری در موش مادر و رحم مشاهده می شود.
• همچنین در دوزهای بالاتر از 1200mg/kg (بیست و چهار برابر دوز درمان) اختلالات اسكلتی در جنین ایجاد می شود.
• در مجموع این تحقیق نشان داد كه دوزهای 300mg/kgو 150، 100، 50 هیچگونه تاثیر سوء جنینی در موشها نداشته است .

9- بررسی مكانیسم سمیت جنینی HESA.A

با توجه به اینكه در مطالعه شماره 8 ، دوزهای بالای تركیب HESA.A اثرات تراتوژنیسیته نشان داد در این مطالعه به منظور مشخص نمودن مكانیسم سمیت جنینی این تركیب با استفاده از كشت جنین در محیط خارج از رحم واستفاده از دو روش Vital staining و TUNNEL نقش آپوپتوزیس را مورد بررسی قرار دادیم.

بر اساس این تحقیق می توان نتیجه گرفت كه فرآورده HESA.A الگوی مرگ سلولی را تغییر می دهد.
این تغییر به گونه ای است كه در غلظتهای متوسط، نسبت آپوپتوزیس به نكروز بیشتر از یك و در غلظتهای بالا كمتر از یك می باشد.

• گزارش دانشكده داروسازی مشهد و مركز تحقیقات علوم دارویی پژوهشكده بوعلی:
  « بررسی نقش آپوپتوزیس بر میزان سمیت جنینی HESA.A (تركیب دریایی) درجنین موش »

10- موتاژنیسیته HESA.A

این مطالعه با همت اعضای هیأت علمی دانشگاه علوم پزشكی مشهد به انجام رسید و با به كارگیری یكی از مهمترین آزمونهای تشخیص ژنی یعنی تست ایمز (Ames)توان بالقوه جهش زایی فرآورده HESA.A را مورد بررسی قرارداد.

نهایتاً فرآورده HESA.A به عنوان یك فرآورده ضد سرطان بدون اثرات موتاژنی شناخته شد.

• گزارش دانشكده داروسازی مشهد به انستیتو كانسر دانشگاه علوم پزشكی تهران:
  «بررسی موتاژنیسیته فرآورده HESA با استفاده از تست ایمز»
  
  1. HESA.A, It,s Cytotoxicity and Mutagenicity onlineabstracts/allposters/262www.immuno2004/
  2. 12th International congress of Immunology and 4th Annual Conference of FOCIS, Montreal, Canada, July 18-23, 2004
  3. The 3rd congress of Health, Environment and Nathral Products , Mashhad, Iran, 25-28 Sep 2004

11- بررسی اثر ضد قارچی فرآورده HESA.A

هدف از انجام این تحقیق، مطالعه و بررسی اثر ضد قارچی فرآورده HESA.A بر روی تعدادی از عوامل قارچی ساپروفیت و بیماریزا بوده است.

عوامل قارچی مخمری شامل كریپتوكوكوس نئوفرمنس و كاندیدا آلبیكانس و عوامل قارچی ساپروفیت شامل پنی سیلیوم، رایزوپوس، آسپرژیلوس نایجر و آسپرژیلوس فومیگاتوس در حضور محیط شاهد، در محیطهای حاوی غلظتهای دارویی 10، 20، 40، 60، 80 و 100 میلیگرم در میلی لیتر محیط كشت داده شدند.

بر طبق نتایج این مطالعه، فرآورده HESA.A بر روی كریپتوكوكوس نئوفرمنس و آسپرژیلوس فومیگاتوس در محیط كشت اثر مهار كنندگی ارزشمندی داشت.( هرچند برای ارزیابی اثر و واكنش میزبان در مقابل قارچها و تاثیرات ضد قارچی این فرآورده، بررسی های تخصصی دیگری در محیطinvivo لازم است. )

• گزارش گروه قارچ وانگل شناسی دانشگاه علوم پزشكی اصفهان:
  « بررسی آزمایشگاهی اثر ضد قارچی فرآورده HESA.A بر روی تعدادی از قارچ ها»

12- اثرات درمانی HESA.A بر استئوساركوم القایی در خرگوش

در این پژوهش پس از ایجاد استئوساركوم ( induced ) به روش استاندارد در 20 عدد خرگوش اثرات درمانی HESA.A مورد بررسی قرار گرفت كه خلاصه نتایج عبارتند از :

• تغییرات بالینی: در گروه درمان پس از دریافت دارو فلج دوطرفه و یكطرفه از بین رفته و تومورها كوچكتر و محو گردید و غذای حیوانات به 95% میزان طبیعی رسید در حالیكه میزان غذای گروه كنترل به 30 - 15 درصد رسیده بود و یكی پس از دیگری مردند.
• در بررسی های میكروسكوپیك و ماكروسكوپیك بافتها تغییری مشاهده نشد.
• آنزیم ها و فاكتورهای بیوشیمیایی خون مانند CBC ، Urea ، Cr ، ESR ، Ca ، P و پروتئین قبل و بعد از ابتلا و همچنین پس از درمان در دو گروه تقریبا یكسان و بدون تغییر بود.

این دستآورد و موفقیت صد در صد در گروه درمان نسبت به گروه شاهد بار دیگر فرآورده HESA.A را به عنوان یك راه حل درمان سرطان مطرح نمود.
«معرفی اثر درمانی داروی HESA.A بر روی Induced Osteosarcoma در خرگوش» اولین كنگره سراسری تحقیقات سرطان 25 الی 28 اردیبهشت ماه 1380 – ارومیه

13- جذب كانونی HESA.A در محل تومور

دریك بررسی مدل حیوانی كه تعداد 7 خرگوش را به شكل Induced Osteosarcoma مبتلا ساختند افزایش جذب«رادیو دارو» دركانونهای تومورال به روش سنتی گرافی استخوان با MDP مشهود بود.

14 – آنالیز HESA.A

پنج آنالیز مختلف از تركیب HESA.A انجام شده است.
به عنوان یك نظریه می توان اثرات ضد توموری و آنتی اكسیدانی این فرآورده را مربوط به عناصر كمیاب و فلزاتی (Ti, V, Co, Cu, Sr, Ca, Mg, Mn, Ga, Cr, Zi,… ) دانست كه در این تركیب وجود داشته و اثرات درمانی یا كمكی و یا پیشگیری كننده آنها در بسیاری از مطالعات مورد بررسی و اثبات قرار گرفته است.
فهرست بعضی از این مطالعات و مراکز انجام آنالیز:

• آنالیز مركز تحقیقات و تولید سوخت اصفهان
• آنالیز پژوهشگاه پلیمر ایران
• آنالیز سازمان انرژی اتمی ایران
• آنالیز دانشگاه تربیت مدرس
• آنالیز دانشگاه آزاد